In den beiden Ringlokschuppen sind 40 originale Schienenfahrzeuge aus der Zeit von 1843 bis 1960 zu sehen, darunter zahlreiche Dampflokomotiven. Unter den Exponaten befindet sich auch der frühe Elektrotriebwagen ET 183 05 aus dem Jahr 1899. Die Ausstellung zeigt deutsche und europäische Eisenbahngeschichte in chronologischer Anordnung und erklärt zugleich die Geschichte des ehemaligen Anhalter Bahnhofs. Zum ersten Mal wird die Rolle der Eisenbahn bei den Deportationen während der Zeit des Nationalsozialismus thematisiert. Rund um einen Güterwagen, wie er typischerweise in Zügen zu den Konzentrationslagern verwendet wurde, sind seit 1988 in der Ausstellungseinheit „Judendeportationen“ mit der Deutschen Reichsbahn 1941–1945“ u. a. die Schicksale von zwölf in der NS-Zeit ermordeten Berlinerinnen und Berlinern dargestellt.